2.3.7 TRASPLANTE AL SUSTRATO

20/04/12

2.3.7 TRASPLANTE AL SUSTRATO

En el momento en que se extraen los explantes enraizados de los frascos, están poco adaptados a crecer en un invernáculo, ya que estos explantes han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas (estructuras responsables de regular la transpiración y pérdida de agua en la planta) que no son completamente funcionales frente a descensos de la humedad relativa, y por lo tanto demasiado lentos para evitar la desecación del explante.

crecer en ambientes tan húmedos también suele implicar la falta de una cutícula con cera bien desarrollada, que representa la barrera física para evitar la pérdida de agua a lo largo de toda la superficie de la planta.

las plántulas recién enraizadas son sensibles a los cambios ambientales y esto va a depender del éxito o el fracaso

Mediante aclimatizacion (endurecimiento) entre 4-8 semanas

Paulatina y secuencialmente

1.       Se controla la luz desde el 20% hasta el 100%

2.       Sustrato en las 2 p´rimeras semanas riega ms 25%

3.       Hr se mantiene desde 100 normal

4.       Se mantiene con nebulización

5.       Normal se cortan las raíces de las plantas in vitro .

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j   literatura citada

    www.biotecnologia.culitivo de tejidos vegetales.com

2.3.6 CAMBIOS FISIOLOGICOS DEL EXPLANTE

19/04/12

2.3.6 CAMBIOS FISIOLÓGICOS DEL EXPLANTE

cambios fisiológicos o sensibilidad, que se expresa como una cambio de comportamiento ocasionado por las condiciones de cultivo; estos cambios ocurren con esterada frecuencia, y son revestidos cuando el cultivo se vuelve a poner en las condiciones originales.

La variabilidad fisiológica en los cultivos de células vegetales es la más fácil de aplicar, debido a la rápida reversibilidad del cambio producido. 

 Los explantes recién enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, de manera que el éxito o el fracaso de todo el proceso dependen de la aclimatación. En esta etapa las plantas sufrirán cambios de diferente tipo que permitirán la adaptación de las mismas a vivir en condiciones naturales.

Los cambios fisiológicos también dependen la adaptación al medio ambiente, ya que implica la humedad relativa y es de un 70%, esto lleva a la evaporación y transpiración de agua en la planta, función que realizan (epidermis, parénquima y estomas) esto para la regulación del agua tanto entrada como salida; cuando se presenta calor y aire o viento seco es menos viable la adaptación de la planta al sustrato y principalmente al medio.

literatura citada

www.lamolina.edu.pe/agronomia/dhorticultura/html/.../chau.doc

2.3.5 CONDICIONES DE INCUBACION

18/04/12

2.3.5 CONDICIONES DE INCUBACION

Para las condiciones ambientales de incubación es conveniente que los cultivos sean incubados en ambientes controlados, en lo que se refiere a la luz y a la temperatura, etc.

Se menciona que para que una planta crezca naturalmente necesita de 5,000 a 8,000 Lux, para un cultivo de tejido vegetal y se necesita 2,000 a 2,500 Lux la cual es una cierta medida de luz natural; por el cual se establece una temperatura de 18-25°C.

Por otro lado la fase gaseosa es nula o es muy poca, ya que la concentración de CO2 al medio ambiente debe ser de 0.03%.

La humedad relativa es la que se encuentra dentro del frasco, presentándose en pequeñas gotas adheridas en la pared del mismo, y representa el 100% de la humedad. Cabe mencionar que la humedad in vitro es diferente a la del ambiente natural.

En ocasiones se puede presentar un fenómeno llamado vitrificación este se presenta con el hinchamiento por el exceso de agua en el explante de la planta, y es cuando los tejidos se han sometido en una humedad no factible para los explantes y requiere de una regulación.

Con el paso del tiempo los explantes en subcultivo pierden el poder vegetativo (mutación) y aumenta las mutaciones (variación somaclonal).

literatura citada
www.inia.gob.pe/boletin/BCIT/.../cultivos_de_tejidos_in_vitro.htm

2.3.4 SIEMBRA DEL EXPLANTE

18/04/12

2.3.4 SIEMBRA DEL EXPLANTE

Los explantes son de diversa naturaleza, pueden ser porciones de tejido, células sueltas, protoplastos, esporas, granos de polen o semillas . El tipo de explante a usarse en los procesos de micropropagación depende de la especie con la que se esté trabajando y de los objetivos que se persigan. Explantes como los meristemos apicales y las yemas axilares son genéticamente muy estables, este tipo de explantes sirve para reproducir múltiples clones de una forma o variedad con características especiales que se desea mantener en el cultivo. Otros explantes como las yemas adventicias son mas bien genéticamente inestables y producen un alto grado de variabilidad en los clones, este procedimiento no es útil para la producción de plántulas con una determinada característica de cultivo, pero si lo es para el fitomejoramiento, ya que mediante esta variación semi–natural, es posible obtener nuevas líneas de cultivo.

Una vez que se ha obtenido el explante, este debe ser correctamente desinfectado para evitar la proliferación de contaminantes biológicos (bacterias, hongos y levaduras principalmente) en el medio, los cuales afectan el crecimiento y desarrollo del explante  y compiten con el mismo deteriorándolo y haciéndolo inservible para cultivo  

Los explantes desinfectados son trasladados a una cámara de flujo laminar (con aire filtrado, libre de microorganismos) donde se realizará la transferencia a un medio de cultivo apropiado al tipo de especie y las necesidades del cultivo. Una vez que el explante está en el medio, se sella el rasco de cultivo y se traslada a una cámara de crecimiento con condiciones de humedad, temperatura y fotoperiodo controladas para su desarrollo.

Una vez que los explantes –luego de algunas semanas en la cámara de crecimiento– han desarrollado algunas raíces y hojas, es el momento de realizar el traspaso al invernadero. Este es uno de los pasos más difíciles de la técnica, ya que los explantes in vitro se encuentran en condiciones ambientales muy diferentes y se alimentan de manera heterotrófica (del medio de cultivo) y el estrés de adaptación a las condiciones de vivero es muy fuerte Un porcentaje de las plántulas clonadas in vitro no sobrevive al invernadero, pero la parte que si sobrevive crece –ya en condiciones normales– y al cabo de una semanas está lista para ser trasladada al campo de cultivo.

literatura citada

http://cultivodevegetales.blogspot.mx/2010/09/explantes.html

2.3.3 EXPLANTE

16/03/12

2.3.3 EXPLANTE

Tejido removido de un organismo y transferido para su crecimiento a un medio artificial de nutrientes

La elección de un Explante apropiado constituye el primer paso para el establecimiento de los cultivos, dicha elección en parte está determinada por el objetivo a estudiar y la especie vegetal involucrada.

El tamaño del Explante es otro aspecto que se debe tener en cuenta para el establecimiento de los cultivos; cuanto más grande sea, mayores son las posibilidades de obtener proliferación callosa; existe un tamaño mínimo para la proliferación, el efecto del tamaño del Explante puede apreciarse en cualquier sistema de cultivo e independientemente de la fuente de donde proviene; su importancia ha sido señalada en cultivos de meristemos, anteras, suspensiones celulares, embriones y protoplastos.

literatura citada

http://biotec-esp2011.blogspot.mx/2011/11/establecimiento-de-cultivos-de-tejidos.html

2.3.2 SELECCION DE PLANTAS MADRES

16/03/12

2.3.2 SELECCIÓN DE PLANTAS MADRES

La selección de la planta madre es muy importante, ya que las plantas que van a obtener son idénticas al progenitor (propagación asexual). Si la planta madre se encuentra enferma, sería deseable conocer el virus especifico presente, pues así las condiciones de cultivo varían, aplicándose termoterapia o simplemente cultivo de meristemos.

El tamaño del inóculo también es importante, pues se tienen meristemos que miden de 0.01 a 0.1 mm de diámetro, y ápices de tallo que miden de 0.1 a 0.3 mm de diámetro; generalmente el número de plántulas libres de virus producidas es inversamente proporcional al tamaño del meristemo o ápice cultivado.

Por último, es importante señalar que el medio de cultivo es un factor esencial, ya que en él juegan un papel vital los requerimientos nutricionales, hormonales y ambientales, específicos de la especie que estemos cultivando; éstos deben de ser semejantes a los que se tienen en condiciones naturales.

literatura citada

http://www.monografias.com/trabajos12/aplicult/aplicult.shtml

2.3.1 ETAPAS DEL CULTIVO DE TEJIDOS

12/03/12

2.3.1 ETAPAS DEL CULTIVO DE TEJIDOS

El cultivo de tejidos vegetales es el proceso que se inicia con un explanto y termina con la obtención de plantas completas, lo que involucra una serie de etapas, las cuales se enumeran a continuación:

Elección de la planta y/o tejido donante de explantos. En esta fase se incluyen los tratamientos, preparación y selección de las plantas madre a partir de las cuales se inicia el cultivo, siendo imprescindible comprobar la identidad (especie, variedad o cultivar) y su estado de salubridad (libre de patógenos, deficiencias o estrés).

Establecimiento: consiste en la desinfección de los explantos (generalmente con hipoclorito de sodio) y su posterior adaptación al medio artificial de modo de inducir callo, brote, raíz o embrión somático, según se desee. Se requiere desinfectar superficialmente el material escogido para evitar que en el medio de cultivo crezcan microorganismos, principalmente bacterias y hongos, que competirán ventajosamente con el explanto

Multiplicación: consiste en generar una cantidad de masa vegetal suficiente para la regeneración del número de plantas necesarias.

Enraizamiento: es el proceso de inducción de la formación de raíces con el fin de convertir alos brotes o embriones somáticos en plántulas completas. El enraizamiento puede realizarse tanto en condiciones in vitro como ex vitro. En el primer caso se transfieren los brotes obtenidos en la etapa anterior a un medio libre de reguladores de crecimiento o que sólo contenga auxinas. Esta operación se realiza en condiciones de esterilidad (en cabina de flujo). En el segundo caso los brotes se sumergen en una solución concentrada de auxinas y se transfieren a un sustrato limpio, no necesariamente estéril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o vermiculita. Los brotes que se utilicen en el enraizamiento ex vitro deben ser vigorosos y poseer hojas bien desarrolladas, ya que las plantas deben realizar la fotosíntesis para obtener la energía necesaria para desarrollarse y formar las raíces.

Rusticación: es el paso de aclimatación de las plántulas obtenidas in vitro a las condiciones del ambiente usuales fuera del tubo o frasco, es decir al suelo o algún sustrato inerte.

El enraizamiento ex vitro permite que la fase de enraizamiento y la fase de aclimatación se logren simultáneamente y que raramente se forme callo en la base de los explantos, asegurando así una conexión vascular, continua entre el vástago y la raíz.

literatura citada

http://es.wikipedia.org/wiki/Cultivo_de_tejidos_vegetales