02/03/12
2.2 ESTERELIZACION
Esterilización significa la eliminación de toda forma de vida de un medio o material, lo que se lleva a cabo generalmente por medios físicos, por ejemplo, filtración, o por muerte de los organismos por calor, productos químicos u otra vía. Esta definición excluye por lo tanto cualquier técnica que resulte solamente en un daño a los microorganismos o atenuación de la actividad de cualquier tipo
Los métodos de esterilización pueden ser de 3 tipos:
- Por destrucción total de microorganismos;
- Por muerte o inactivación; y
- Por eliminación con medios físicos.
Por destrucción total se entiende un proceso muy violento, que casi siempre implica calentamiento apreciable del material, como ocurre con la aplicación de una llama, que es lo que hacemos en el laboratorio cuando flameamos un ansa de platino o las bocas de tubo de ensayo o erlenmeyers. Otra manera de destruir contaminantes es con el uso de poderosos agentes oxidantes. Por supuesto ésta metodología, aunque es efectiva, está muy restringida en su empleo.
La muerte o inactivación significa la eliminación de microorganismos sin que exista necesariamente desintegración de las células. Se puede efectuar por calentamiento, seco o húmedo, por radiaciones o por agentes químicos. El calor húmedo, generalmente en forma de vapor bajo presión, es muy útil y de gran valor en la esterilización en el laboratorio, que se efectúa en autoclave, o en la industria cuando se esterilizan los medios de cultivo y los equipos de fermentación. En el caso de los autoclaves, se pueden alcanzar presiones de 1 a 3 atmósferas. En escala grande el equipo de producción es esterilizado con vapor saturado bajo presión, y la presión requerida debe ser alcanzada en todas las partes del equipo y el aire debe ser purgado totalmente del sistema (como ocurre también en el caso de los autoclaves) porque la transferencia de calor disminuye mucho en ese caso. Después de la esterilización se mantienen las condiciones asépticas, haciendo pasar vapor por las válvulas y sellos.
La eliminación física está restringida a la esterilización de gases líquidos, y es fundamentalmente llevada a cabo por filtración mediante filtros absolutos o filtros fibrosos.
Los filtros absolutos son de materiales cerámicos, de vidrio o de metal sinterizado con poros tan pequeños que la penetración de los microorganismos no es posible.
Los filtros fibrosos no son absolutos y el material filtrante puede ser lana de vidrio, amianto y esteres de celulosa, siendo las fibras de un diámetro variable de 0.5 a 15 micrones.
Calor
La utilización de este método y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición y la temperatura.
Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del calor. El calor provoca desnaturalización de proteínas, fusión y desorganización de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los microorganismos.
2.1 Fuego Directo: Este procedimiento consiste en exponer a la llama de un mechero de Bunsen el objeto que se desea esterilizar. Cuando éste es de metal se deja permanecer en el área de reducción de la llama hasta que se ponga al rojo (asas de cultivo; algunas agujas, etc) . Si es de vidrio se deja un tiempo prudencial, procurando que la llama llegue a todos lados. Antes de utilizar el objeto esterilizado es necesario dejarlo enfriar en un sitio aséptico. Este procedimiento tiene limitaciones debido a que deteriora los objetos y si son de gran volumen, la esterilización nunca es perfecta.
2.2 Calor Seco: El calor seco produce desecación de la célula, esto es tóxico por niveles elevados de electrolitos y fusión de membranas, residuos que quedan adheridos al objeto estéril. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en con éstos.
Aún así se sigue utilizando el calor seco en todos los laboratorios para la esterilización de placas de petri y pipeteros (recipientes metálicos para alojar pipetas para la siembra de sustancias líquidas).
La acción destructiva del calor sobre proteínas y lípidos componentes o nutrientes de los microorganismos, requiere temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.
Vapor bajo presión (autoclave
El vapor bajo presión es muy eficiente para destruir todas
las formas de bacterias, hongos y esporas, es el método más utilizado para
esterilizar diferentes materiales incluyendo los medios de cultivo, el
autoclave más utilizado actualmente en el laboratorio es el contraparte de
mayor tamaño de la olla de presión común. Al utilizarlo es necesario extraer
todo el aire antes de empezar el proceso de esterilización ya que, a presiones
iguales, la temperatura de una mezcla de aire y vapor no es alta como la del
vapor puro; la extracción del aire se logra automáticamente al permitir que el
vapor de aire expulse el aire del aparato, antes de cerrar la válvula
correspondiente. La temperatura dentro de la autoclave se regula mediante la
presión y es directamente proporcional a esta, la presión se lee en un
manómetro que forma parte del autoclave.
Filtración: La esterilización de líquidos va acompañada de
la filtración a través de filtros especiales a prueba de hongos y bacterias.
Los filtros y oros aparatos se deben esterilizar antes de tratar de utilizarlos
para remover los contaminantes de un líquido
literatura citada
http://webapp.ciat.cgiar.org/biotechnology/cultivo_tejidos/capitulo1.pdf
www.biologia.edu.ar/microind/esterilización.htm
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